【Sanger法测序的原理是什么】Sanger法测序，又称链终止法，是一种经典的DNA测序技术，由弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年提出。该方法基于DNA复制过程，并利用特殊的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止链的延伸，从而实现对DNA序列的精确测定。
一、Sanger法测序的基本原理总结
Sanger法测序的核心在于通过控制DNA合成反应中不同种类的双脱氧核苷酸（ddNTP）的加入，使新合成的DNA链在特定位置终止。通过对这些终止片段进行电泳分离，可以确定原始DNA模板的碱基序列。
整个过程包括以下几个关键步骤：
1. 模板准备：将待测的DNA片段作为模板。
2. 引物结合：使用一段已知序列的短单链DNA作为引物，与模板互补结合。
3. DNA聚合酶作用：在DNA聚合酶的作用下，引物开始延伸，合成新的DNA链。
4. 随机加入ddNTP：在反应体系中加入四种不同的ddNTP（ddATP、ddTTP、ddCTP、ddGTP），它们会随机地被掺入到正在合成的新链中。
5. 链终止：一旦ddNTP被掺入，由于其缺少3'-OH基团，无法继续延伸，导致链终止。
6. 电泳分析：将四个独立的反应产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据片段大小排列顺序，读取DNA序列。
二、Sanger法测序原理对比表
| 步骤 | 内容描述 | 关键要素 |
| 模板准备 | 将待测DNA片段作为模板 | DNA模板、引物 |
| 引物结合 | 引物与模板互补配对 | 碱基互补配对原则 |
| DNA聚合酶作用 | 引物延伸，合成新链 | DNA聚合酶、dNTPs |
| ddNTP掺入 | 随机引入双脱氧核苷酸 | ddATP、ddTTP、ddCTP、ddGTP |
| 链终止 | ddNTP缺乏3'-OH导致链终止 | 双脱氧核苷酸特性 |
| 电泳分析 | 分离不同长度的DNA片段 | 聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 序列读取 | 根据片段大小判断碱基顺序 | 从5'到3'方向读取 |
三、Sanger法测序的优点与局限性
优点：
- 准确度高，适用于小片段DNA测序；
- 技术成熟，操作流程清晰；
- 适合实验室常规使用。
局限性：
- 通量低，不适合大规模基因组测序；
- 成本较高，耗时较长；
- 对长片段或复杂区域测序效果较差。
四、总结
Sanger法测序是一种基于DNA复制和链终止原理的经典测序技术，通过引入双脱氧核苷酸实现对DNA序列的逐个碱基解析。虽然随着新一代测序技术（如Illumina、PacBio等）的发展，Sanger法的应用逐渐减少，但在某些特定场景下，如验证测序结果或小片段测序中，仍具有不可替代的价值。
